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米曲霉谷氨酰胺酶在黑曲霉中的重組表達與酶學特性

作者:admin 發布時間:2022/07/28 瀏覽量:35

本期為您推薦華南理工大學潘力教授研究團隊發表在知名期刊《現代食品科技》上的一篇文章:米曲霉谷氨酰胺酶在黑曲霉中的重組表達與酶學特性。

文章摘要內容如下:

谷氨酰胺酶可以催化谷氨酰胺脫氨生成谷氨酸,屬于絲氨酸依賴性β-內酰胺酶和青霉素結合蛋白的超家族,有關真菌來源的谷氨酰胺酶表達與性能的報道仍然很少。黑曲霉屬于絲狀真菌,具有強大的蛋白分泌表達能力以及成熟的蛋白翻譯后修飾系統,在工業上已被應用于食品級酶制劑的生產宿主。近年來,黑曲霉的基因組編輯技術已成功建立,將工程菌表達與常壓室溫等離子體誘變技術(ARTP )結合,可進一步提高工程菌的蛋白產量。

本研究將米曲霉 RIB40來源的谷氨酰胺酶在黑曲霉宿主中分泌表達?;谠撗芯克⒈硇丸b定板與孔板培養的通量鑒定篩選方法成功得到重組表達谷氨酰胺酶的轉化子 H-gahB,最高酶活力達到 1.35 U/mL。為了增加目的基因在宿主中的拷貝數,采用 CRISPR/Cas9 基因組編輯技術重新構建高拷貝的谷氨酰胺酶表達菌株C-gahB,其酶活力提高到 3.56 U/mL,約為 H-gahB 的 2.64 倍。進一步采用 ARTP 誘變技術對工程菌進行誘變,獲得了谷氨酰胺酶工程菌株 A-gahB,其酶活力提升到 4.16 U/mL,比出發菌株 C-gahB 的酶活力提高了 0.17 倍。純化后的重組 gahB 的比酶活達到 40.63 U/mg,最適溫度為 37 ℃,最適 pH 為 7.0,其在 20 ℃至 40 ℃及 pH 5.5 至 8.0 之間穩定性較好。K+ gahB 的酶活力具有激活作用,Zn2+ Mn2+則對 gahB 的酶活力有較為強烈的抑制作用。當鹽濃度為 18%時,gahB 表現出 35.38%的相對酶活力。本研究首次在黑曲霉中實現了來源于米曲霉 RIB40 的谷氨酰胺酶 gahB 的重組分泌表達,為此后對米曲霉谷氨酰胺酶的研究提供了基礎。

 

文章精彩內容如下:

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